Значение ван-ден-берга реакция в медицинских терминах. Химические тесты для выявления желчных пигментов

Химическая формула билирубина IXα

Билирубин (лат. bilis желчь + ruber красный) - один из желчных пигментов жёлто-красного цвета.

Химический состав молекулы билирубина - C 33 H 36 O 6 N 4 . Молекулярная масса - 584,68. В чистом виде билирубин представляет собой кристаллическое вещество, состоящее из кристаллов ромбоидально-призматической формы жёлто-оранжевого или красно-коричневого цвета, трудно растворимое в воде.

В основе молекулы билирубина, как и всех его производных - четыре пиррольных кольца, унаследованные от гемоглобина. Две гидроксильные группы обусловливают кислотные химические свойства билирубина и его способность образовывать соли. Расположение гидроксильных групп имеет варианты, основной из которых - их присоединение ко 2 и 3 пиррольным кольцам (билирубин IXα).

Химические формы билирубина и их названия

Традиционно выделяют две основные химические формы билирубина:

свободный билирубин + глюкуроновая кислота = связанный билирубин

При этом билирубин может быть связан с одной молекулой глюкуроновой кислоты (моноглюкуронид билирубина) или с двумя (биглюкуронид билирубина).

Билирубин также разделяют на непрямой и прямой . С давних пор сложилась практика, что непрямой билирубин отождествляют со свободным, а прямой - со связанным. Но это не совсем верно.

О различии прямого билирубина и связанного

Дело в том, что термины "непрямой" и "прямой" билирубин являются не химическими, а технологическими и отражают результат широко используемой для лабораторной идентификации билирубина . Поскольку считалось, что непрямой билирубин представлен свободным, а прямой - исключительно связанным, то эти термины использовались как взаимозаменяемые.

Эта простая схема утратила корректность после того, как обнаружили ещё одну химическую форму билирубина: билипротеин , или дельта-билирубин .

Дельта-билирубин принимает участие в реакции Ван ден Берга аналогично связанному билирубину и учитывается в результате совместно с ним в качестве прямого. Поэтому формула "прямой билирубин = связанный билирубин" верна только в отношении здоровых людей, у которых дельта-билирубин практически отсутствует. При некоторых же болезненных состояниях прямой билирубин может на 60-90% состоять из дельта-билирубина:

прямой билирубин = связанный билирубин + дельта-билирубин

О свойствах и диагностическом значении читайте ниже.

Источники образования билирубина

Практически единственным источником происхождения билирубина в организме является гем .

Гем представляет собой структуру, включающую, подобно билирубину, четыре пиррольных кольца, а кроме того, атом железа. Гем входит в состав молекул гемоглобина (кислород-переносящего белка красных кровяных телец), сократительного мышечного белка миоглобина и клеточных ферментов цитохромов .

Основной, эритроцитарный поток билирубина (85% от всего количества) формируется в процессе утилизации гемоглобина отживших свой век (около 120 дней) эритроцитов крови. Такие эритроциты извлекаются из кровяного потока и разрушаются главным образом в селезенке, а также в печени и в костном мозге. Повышение билирубина эритроцитарного происхождения бывает при гемолизе (так называют массовый распад эритроцитов).

Остальные источники дают начало т. н. шунтовому билирубину, который составляет до 15% от всего его количества. Среди источников шунтового билирубина выделяют:

• Дефектные эритроциты и их незрелые предшественники. Такие клетки в результате постоянной отбраковки погибают вскоре после своего рождения, не успев покинуть "инкубатор" клеток крови - костный мозг. Число таких клеток, и соответственно, количество шунтового билирубина резко возрастает при некоторых наследственных, аутоиммунных, опухолевых заболеваниях системы крови. В нормальных же условиях костный мозг дает не более 7% билирубина.
• Небольшое количество билирубина образуется в процессе постоянного обновления и деструкции мышечного белка миоглобина. Тем не менее, травмы, сопровождающиеся обширным разрушением мышечной ткани могут привести к кратковременному повышению уровня билирубина в крови.
• Незначительная часть билирубина также поступает со всех тканей организма в результате распада цитохромов и некоторых белков, не содержащих гем, в частности, пероксидаз.

Как показали денситометрические исследования с применением меченого радиоактивным изотопом глицина, гем, дающий начало шунтовому билирубину, существует не более 10 дней. В то же время длительность существования гема нормальных эритроцитов совпадает с продолжительностью жизни самих эритроцитов - 120 дней. Зная долю шунтового билирубина в его общей концентрации, можно судить о характере болезненного процесса, однако пока такой анализ доступен только в научных исследованиях.

Трансформацией гема в билирубин, помимо многих других задач, заняты тканевые макрофаги , являющиеся частью иммунной системы организма. Тканевые макрофаги имеются во всех органах, располагаясь обычно в их соединительной ткани, но преимущественно они сосредоточены в селезенке, в лимфатических узлах, в печени и в костном мозге. Все тканевые макрофаги ведут свою родословную от моноцитов, выращенных в кроветворной матрице костного мозга, но в различных органах они специализированы для выполнения особых задач, а потому имеют и особые названия - например, купферовы клетки печени, гистиоциты селезенки и др. Ранее систему тканевых макрофагов называли ретикулоэндотелиальной системой, но сейчас этот термин признан устаревшим.

• 80% билирубина производят купферовы клетки печени
• оставшуюся часть - макрофаги костного мозга и селезенки
• совсем небольшое количество - гистиоциты соединительной ткани всех органов

Каждые сутки в организме человека подвергаются деструкции 2*10 8 состарившихся эритроцитов. При этом высвобождается 6-8 г гемоглобина, из которого, в свою очередь, берет начало 250-350 мкг билирубина.

Высвободившийся гем поглощается макрофагами, после чего преобразуется с участием внутриклеточного фермента гемоксигеназы в промежуточное вещество биливердин . Одновременно от гема отщепляется атом железа и окись углерода. Биливердин, имея зеленый цвет, принадлежит к числу пигментных веществ. Кроме того, в отличие от билирубина, он хорошо растворим в воде.

На втором этапе расщепления гема при помощи фермента биливердинтрансферазы происходит трансформация биливердина в билирубин - пигментное вещество желто-оранжевого цвета, нерастворимое в воде. Как известно, в составе каждой молекулы гемоглобина входят четыре единицы гема. Соответственно, при расщеплении одной молекулы гемоглобина образуются четыре молекулы билирубина и четыре атома железа.

Как уже говорилось, в качестве побочного продукта при разрушении углеродных связей гема выделяется окись углерода (СО), причем это единственная реакция в организме, которая дает на выходе это вещество. Это обстоятельство используется в перспективном методе исследования: измеряя концентрацию окиси углерода в выдыхаемом воздухе, можно оценить скорость расщепления гема в организме.

Последовательным превращением гема в зеленый биливердин, а затем в желто-красный билирубин объясняется изменение цвета синяков после ушибов от темно-синего в сине-зеленый, а затем в желтый.

Первоначально в организме образуется только свободный билирубин. Связанный же билирубин появляется позже в результате трансформации свободного билирубина.

Свойства свободного билирубина

Итак, в нашем организме существует постоянно действующий конвейер производства свободного билирубина как часть физиологического механизма замены старых эритроцитов крови. Это порождает несколько трудно решаемых проблем:

• Свободный билирубин - токсичное вещество, а потому необходим надежный механизм его выведения из организма и поддержания его концентрации на безопасно низком уровне. Токсичность билирубина проявляется в первую очередь в отношении мозговой ткани. Даже умеренно повышенный уровень свободного билирубина проявляется невыраженными симптомами со стороны нервной системы: ослабление внимания, утомляемость и др. Впрочем, у взрослых концентрация свободного билирубина никогда не достигает настолько опасного уровня, чтобы повлечь повреждение нервной системы. А вот у новорожденных такое случается. В частности, иммунологический конфликт может привести к массивному гемолизу и развитию т. н. "ядерной" желтухи. При этом свободный билирубин, уровень которого в сыворотке крови может повыситься в десятки раз и достичь 300 мкмоль/л и выше, накапливается в мозговой ткани, вызывая необратимые изменения в подкорковых ядрах головного мозга.
• Свободный билирубин практически нерастворим в воде. Поскольку все биологические жидкости организма являются водными растворами, свободный билирубин невозможно вывести из организма в том виде, в каком он есть, не изменив его химической структуры.
• Вместе с тем свободный билирубин хорошо растворим в жирах. Благодаря этому свойству он легко преодолевает фосфолипидные мембраны т. н. гемато-энцефалического барьера, призванного ограждать мозговую ткань от проникновения в нее многочисленных токсических веществ, циркулирующих в кровяном русле.

В кровеносном русле свободный билирубин транспортируют белки-альбумины, удерживая его на своей поверхности. 1г альбумина переносит 8,5мг билирубина. Комплекс альбумин-билирубин непрочный и распадается при первой возможности.

Реакция Ван ден Берга идентифицирует свободный билирубин в качестве непрямого.

Билирубин как антиоксидант

В свете новейших исследований несколько изменилось традиционное представление о билирубине как об однозначно "шлаковом" продукте. Свободный билирубин обладает выраженными антиоксидантными свойствами, и организм активно их использует.

Антиоксидантная активность билирубина значительно превышает таковую у α-токоферола (витамина Е), который считают классическим антиоксидантом. Так, билирубин инактивирует H 2 O 2 в концентрации, которая в 10 раз больше его собственной. В частности, он препятствует перекисному окислению липидов клеточных мембран, а также окислению мембранных белков. Наиболее значимы антиоксидантные свойства билирубина в отношении нервной ткани и сердечной мышцы, поскольку эти ткани не располагают достаточно мощной собственной защитой от свободных радикалов.

Обнаружилось, что люди с хронически высоким уровнем свободного билирубина значительно реже болеют атеросклерозом сосудов и связанными с ним заболеваниями сердца. Доказана обратнопропорциональная зависимость между уровнем свободного билирубина в крови и сердечной патологией.

Одно из исследований, охватившее 10000 пациентов, доказало более низкую смертность от опухолевых заболеваний среди людей с высоким уровнем свободного билирубина.

В свете этих данных выглядит целесообразной трансформация хорошо растворимого в воде биливердина в "неудобный" нерастворимый билирубин.

Преобразование свободного билирубина в связанный

Поскольку, как уже сказано выше, свободный билирубин нерастворим в воде, его выведение из организма невозможно без предварительной трансформации в другие, водорастворимые вещества.

Конкретным местом такой трансформации является основная структурная единица печени - печёночная клетка, или гепатоцит. Гепатоциты собраны в печёночные дольки. Печёночная долька устроена таким образом, что каждая печеночная клетка с одной стороны имеет контакт с венозным кровеносным капилляром (т. н. синусоидом), а с другой к ней подведен жёлчный капилляр.

Свободный билирубин, транспортируемый на поверхности альбумина, из венозной крови синусоида перемещается сначала в пространство Диссе, разделяющее капилляр и печеночную клетку, а затем через клеточную мембрану внутрь гепатоцита, одновременно освобождаясь от связи с альбумином. Такое перемещение происходит без затраты энергии благодаря перепаду концентрации.

Внутри клетки билирубин соединяется обратимой связью с белками-лигандинами. Лигандины препятствуют "бегству" билирубина обратно в венозный капилляр, а также препровождают его в сетчатую структуру - эндоплазматический ретикулум.

В эндоплазматическом ретикулуме имеются т. н. микросомы - пузырьки, наполненные ферментами. На поверхности микросом при каталитическом участии фермента глюкуронилтрансферазы происходит реакция соединения свободного билирубина с глюкуроновой кислотой, в результате чего появляется новое вещество - связанный, или конъюгированный билирубин.

Данная реакция может проходить в один или два цикла, давая на выходе соответственно моноглюкуронид или биглюкуронид билирубина. Соотношение моноглюкуронида и биглюкуронида составляет 4:1.

Глюуронизация билирубина является одним из самых "узких мест" в его метаболизме, поскольку она лимитирована количеством фермента глюкуронилтрансферазы. Это количество резко снижено (менее 1-3% от нормы) при некоторых наследственных заболеваниях, в частности при .

Затрудненное выделение связанного билирубина в желчь ведет к его накоплению в крови. В таких случаях почки вынуждены взять на себя функцию его выведения из организма, хотя в нормальных условиях они этого не делают. Появление в моче билирубина служит признаком серьезного заболевания.

Свойства связанного билирубина

Связанный билирубин своими свойствами выгодно отличается от свободного:

• он нетоксичен
• хорошо растворим в водных средах
• легко выводится из организма, преимущественно с желчью, а при необходимости и с мочой.

Связанный билирубин принимает участие в прямой реакции Ван ден Берга, поэтому его обычно называют прямым билирубином.

Следует отметить и нехорошее свойство связанного билирубина: при его избыточной концентрации в жёлчи он склонен к кристаллизации и к образованию билирубиновых камней в жёлчном пузыре. Поскольку высокая концентрация связанного билирубина является следствием повышенного образования в организме свободного билирубина, то причинами таких состояний обычно бывают и другие забалевания системы крови.

О решающей роли печени в метаболизме билирубина

Таким образом, единственным органом в человеческом организме, способным осуществить преобразование свободного билирубина в связанный, является печень.

Решающая роль печени в метаболизме билирубина ещё более очевидна, если принять во внимание, что 80% свободного билирубина также производится в печени купферовыми клетками. Уровень билирубина является одним из самых надёжных индикаторов функционального состояния печени, поскольку почти весь процесс обмена билирубина находится в теснейшей зависимости от этой функции.

Забота об утилизация билирубина не случайно возложена на печень, которую по праву называют главной химической лабораторией организма. Печень преобразует в нетоксические химические формы огромное количество веществ, как естественно образующихся в организме, так и попадающих в него извне, в том числе и лекарственных веществ.

Некоторые конечные продукты метаболизма преимущественно выводятся из организма через почки с мочой, другие - через печень с жёлчью. Какой из двух путей предпочтителен для каждого конкретного вещества - это обусловлено особенностями его химического строения и физиологии печени и почек. Общий принцип таков: почки хорошо выводят вещества с молекулярной массой менее 300 у. е., остальные выводятся главным образом с жёлчью, в их числе и билирубин.

Следует сказать, что для переработки билирубина печёночная клетка использует универсальные ферментные системы, которые наряду с билирубином принимают участие в метаболизме многих других веществ. Наряду с экономией ресурсов организма такая ситуация иногда приводит и к отрицательным последствиям. Дело в том, что ряд веществ, в частности многие лекарственные препараты конкурируют с билирубином в ферментативных реакциях и при передозировке способны полностью вытестить последний из метаболического процесса. Это приводит к накоплению непрямого билирубина в организме и к развитию т. н. "неконъюгированной" желтухи. К числу таких препаратов принадлежит парацетамол и некоторые другие нестероидные аналгетики, некоторые антибиотики.

Связанный билирубин выделяется из гепатоцита в желчный капилляр и выводится с желчью в кишечник. Выделение связанного билирубина в желчный капилляр требует затраты энергии, поэтому повреждение печеночных клеток при гепатитах, циррозах и др. приводит к расстройству этого процесса.

Трансформация билирубина в кишечнике и её продукты

Таким образом, связанный билирубин выделяется с потоком желчи в кишечник. Именно билирубин придает желчи грязно-зеленый оттенок.

Поскольку обитающие в кишечнике микроорганизмы активно работают над его содержимым, билирубин также повергается дальнейшей трансформации. В процессе переработки билирубина в кишечнике образуются многочисленные промежуточные вещества. Процесс переработки билирубина в кишечнике является многоэтапным и происходит с образованием многочисленных промежуточных веществ.

Основные этапы кишечной трансформации:

• Под воздействием бактериального фермента β-глюкуронидазы конъюгированный билирубин подвергается гидрозизу (расщеплению) с образованием свободного билирубина
• Свободный билирубин в результате серии реакций восстановления трансформируется в целый ряд веществ под общим названием "уробилиногены", или "уробилиноиды". В основе уробилиногенов, как и билирубина, находится структура из четырех пиррольных колец. Уробилиногены бесцветные.

В числе уробилиногенов важнейшими являются такие вещества:

• мезобилиноген - родоначальник группы уробилиногенов
• стеркобилиноген
• собственно уробилиноген

Большая часть уробилиногенов в итоге трансформируется в конечные пигментные продукты - стеркобилин и уробилин, которые имеют оранжево-коричневый цвет. Именно эти вещества придают фекалиям характерный цвет. Обесцвечивание фекалий свидетельствует об отсутствии в них билирубина, что бывает при гепатитах или при перекрытии желчевыводящих путей. 10-20% уробилиногенов всасываются из кишечника и через систему воротной вены возвращаются в печень. Печень же делает с ними то, что умеет: переводит в связанный билирубин и отправляет обратно в кишечник. В норме не более 2-5% уробилиногенов выводятся с мочой. Такое небольшое количество не выявляется при обычном лабораторном исследовании мочи.

При гепатитах печень не справляется с утилизацией уробилиногенов, вследствие чего они обнаруживаются в моче. - важный диагностический признак заболеваний печени.

Реакция Ван ден Берга и другие методы определения билирубина

Настало время объяснить происхождение несколько странных названий: "прямой" и "непрямой" билирубин. А названы так две формы билирубина с легкой руки господина Ван ден Берга (Van Den Berg), разработавшего еще в 1916 году реакцию идентификации билирубина в сыворотке крови при помощи реактива Эрлиха. По прошествии 100 лет реакция, названная в его честь реакцией Ван ден Берга, остается в лабораторной практике основным методом исследования содержания билирубина.

Не углубляясь в детали методики, которая за сотню лет подверглась многочисленным модификациям, отметим её принципиальную особенность - двухэтапность выполнения:

• Первый этап (прямая реакция Ван ден Берга) : в пробирку с исследуемой сывороткой крови добавляют реактив Эрлиха Вскоре при наличии в сыворотке связанного билирубина содержимое пробирки приобретает ярко-розовый цвет. Свободный билирубин, блокированный альбумином, не принимает участия в реакции. При помощи колориметрического прибора по интенсивности окраски можно определить количественное содержание связанного билирубина. Таким образом, связанный билирубин, принимающий участие в прямой реакции, назван "прямым" билирубином.
• Второй этап (непрямая реакция Ван ден Берга) : в другую пробирку с исследуемой сывороткой сначала добавляют вещество, осаждающее альбумины. В оригинальном исполнении Ван ден Берга с этой целью использовался 96˚ этиловый спирт. В дальнейшем этиловый спирт был заменен на более эффективные вещества. Альбумин при этом оседает на дно пробирки, а разблокированный свободный билирубин приобретает способность вступать в химическую реакцию с реактивом Эрлиха, что он и делает. Одновременно с непрямым билирубином в реакции участвует и прямой билирубин (если он есть), то есть непрямая реакция Ван ден Берга определяет общий билирубин как сумму прямого и непрямого билирубина. Содержание непрямого билирубина вычисляют как разницу общего и прямого билирубина:

  непрямой билирубин = общий билирубин - прямой билирубин

Реакция Ван ден Берга, наряду с несомненными достоинствами, в числе которых простота выполнения и наглядность результата, имеет и существенный недостаток - она даёт завышенное содержание прямого билирубина. Так, в сыворотке здоровых людей этот метод обнаруживает до 5,4 мкмоль/л прямого билирубина, который составляет до 25% от общего. В действительности, как показывают более точные методы, у этих людей общий билирубин почти на 100% представлен непрямым, а прямой практически отсутствует. Впрочем, в клинической практике важнее знать не содержание билирубина само по себе, а его динамику, для чего необходимо обеспечить сопоставимость результатов, полученных в разное время и в разных лабораториях.

• α - свободный билирубин
• β - моноглюкуронид билирубина
• λ - биглюкуронид билирубина

Разработаны и другие методы обнаружения билирубина, подробное описание которых выходит за рамки этой статьи:

• спектрофотометрия
• газоанализатор
• высокоэффективная жидкостная хроматография
• неинвазивный метод - рефлективная денситометрия

Среди названных методов наиболее перспективна высокоэффективная жидкостная хроматография. Данная методика позволяет определить содержание четырёх фракций билирубина:

• α - свободный билирубин
• β - моноглюкуронид билирубина
• λ - биглюкуронид билирубина
• δ - дельта-билирубин, или билипротеин

Дельта-билирубин

Дельта-билирубин представляет собой соединение конъюгированного билирубина (биглюкуронида или моноглюкуронида билирубина) с альбумином. В научной литературе часто используют и другое название этого вещества: "билипротеин". Это вещество желтого цвета.

Реакция Ван ден Берга не позволяет отдельно определить дельта-билирубин и идентифицирует его совместно с глюкуронидами билирубина в качестве прямого, поскольку все эти вещества вступают в прямую реакцию с реактивом Эрлиха аналогичным образом. Для селективного определения его содержания в сыворотке крови используют высокоэффективную жидкостную хроматографию.

В биохимическом и физиологическом аспектах дельта-билирубин обладает рядом особенностей, которые в целом позволяют рассматривать его наряду со свободным и связанным билирубином как самостоятельную, третью форму билирубина:

• В отличие от комплекса альбумина со свободным билирубином, дельта-билирубин является достаточно устойчивым веществом, поскольку его компоненты необратимо связаны прочной ковалентной химической связью.
• Синтез молекулы дельта-билирубина не требует участия внутриклеточных элементов, поэтому возможен in vivo и in vitro, т. е. как в организме, так и в пробирке.
• Дельта-билирубин нетоксичен для тканей организма.
• Из-за чрезмерной массивности своей молекулы дельта-билирубин в неизменённом виде совершенно не выводится из организма ни с желчью, ни через почки.
• Установлено, что период полураспада дельта-билирубина в организме такой же, как и у обычного альбумина, и составляет 14-21 день. Только после разрушения альбумина появляется возможность вывести из организма ранее соединённый с ним глюкуронид билирубина, преимущественно с жёлчью.

В нормальных условиях дельта-билирубин не обнаруживается в значимых количествах. Его содержание резко повышается при холестазе, т. е. нарушении выработки и выделения компонентов желчи на фоне сохранённой функции синтеза конъюгированного билирубина. Холестаз может быть как внутрипеченочным при гепатитах и циррозах печени, так и внепеченочным, обусловленным затруднением для оттока жёлчи во внепеченочных жёлчных путях, что обычно бывает при их закупорке жёлчным камнем.

Содержание дельта-билирубина при холестазе может достигать 60-70 и даже 90% от прямого. Благодаря своей "живучести" в организме дельта-билирубин (а вместе с тем и прямой билирубин в целом) остаётся высоким ещё в течение 1-1,5 недель после нормализации оттока жёлчи. Этим объясняется непонятный ранее феномен, когда прямой билирубин длительное время остаётся высоким, вопреки явному клиническому улучшению и нормализации других лабораторных показателей, в частности .

В то же время не происходит повышения содержания дельта-билирубина при неконъюгированных гипербилирубинемиях (накопление в крови неконъюгированного билирубина, что бывает при , и некоторых других состояниях).

Люмирубин и другие фотопродукты билирубина

В своей обычной и наиболее устойчивой конфигурации молекула билирубина свернута таким образом, что одни активные группы блокированы другими, что и определяет ее нерастворимость. Под воздействием синего света билирубин способен превращаться в много-численные фотопродукты, большинство их которых благодаря разблокированным гидроксильным группам хорошо растворимы в воде

В свое время химики заинтересовались парадоксальной растворимостью свободного билирубина. Теоретически молекула билирубина благодаря наличию двух гидроксильных групп COOH - должна обладать выраженной полярностью. Как известно, вещества с поляризованной молекулой растворимы в воде и нерастворимы в жирах. В действительности свободный билирубин ведет себя противоположным образом.

Загадку удалось разгадать при помощи рентренокристаллографии. Выяснилось, что молекула свободного билирубина имеет такую пространственную конфигурацию, в которой поляризующие гидроксильные группы блокированы внутренними межводородными связями (т. н. Z-Z связи). Такая конфигурация молекулы билирубина наиболее устойчива и является основной, поскольку располагает минимумом пространства и энергии. Также было обнаружено, что наряду с основной конфигурацией существуют и многочисленные другие варианты.

Наибольшего интереса среди них заслуживают фотопродукты билирубина, которые образуются под воздействием синего света в присутствии атомарного кислорода. Молекулы билирубина, поглощая энергию фотонов света, меняют внутренние межатомные Z-Z связи на более высокоэнергетические Z-E и E-E связи. При этом вместе с изменением пространственной конфигурации молекул радикально изменяются и их свойства - они становятся водорастворимыми.

Фотопродукты благодаря хорошей водорастворимости быстро выводятся из организма печенью. Самой высокой скоростью выведения обладает один из фотопродуктов с E-E связями, названный люмирубином . Фотопродукты отличаются малой продолжительностью жизни, поскольку такие молекулы при первой возможности избавляются от излишней энергии и возвращаются к исходной, основной конфигурации.

Способность свободного билирубина образовывать водорастворимые фотопродукты используют для лечения желтухи новорожденных методом фототерапии.

Читайте продолжение:

В клинической практике используются различные методы определения билирубина и его фракций в сыворотке крови.

Наиболее распространенным из них является биохимический метод Ендрассика-Грофа

Он основан на взаимодействии билирубина с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием азопигментов. При этом связанный билирубин (билирубин-глюкуронид) дает быструю («прямую») реакцию с диазореактивом, тогда как реакция свободного (не связанного с глюкуронидом) билирубина протекает значтельно медленнее. Для ее ускорения применяют различные вещества–акселераторы, например кофеин (метод Ендрассика-Клеггорна-Грофа), которые освобождают билирубин из белковых комплексов («непрямая» реакция). В результате взаимодействия с диазотированной сульфаниловой кислотой билирубин образует окрашенные соединения. Измерения проводят на фотометре.

ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ

В 3 пробирки (2 опытные пробы и холостая) вводят реактивы, как указано в таблице. Диазореакция

Для определения связанного билирубина измерение проводят спустя 5-10 мин после добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии в реакцию вступает несвязанный билирубин. Для определения общего билирубина пробу для развития окраски оставляют стоять 20 мин, после чего измеряют на фотометре. При дальнейшем стоянии окраска не изменяется. Измерение проводят при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя в 0,5 см против воды. Из показателей, полученных при измерении общего и связанного билирубина, вычитают показатель холостой пробы. Расчет производят по калибровочному графику. Находят содержание общего и связанного билирубина.Метод Ендрассика, Клеггорна и Грофа прост, удобен в практике, не связан с применением дефицитных реактивов и является наиболее приемлемым для практических лабораторий.Определение рекомендуется приводить сразу же после забора проб, чтобы избежать окисления билирубина на свету. Гемолиз сыворотки снижает количество билирубина пропорционально присутствию гемоглобина. Следовательно, сыворотка крови не должна быть гемолизирована.

Ряд веществ - гидрокортизон, андрогены, эритромицин, глюкокортикоиды, фенобарбитал, аскорбиновая кислота - вызывают интерференцию.

Постоение калибровочного графика при методе ендрассика.

Способ I - Шелонга-Вендес использованием стабилизирующего свойства белка сыворотки крови. Основной раствор билирубина: в колбе вместимостью 50 мл растворяют 40 мг билирубина в 30-35 мл 0,1 моль/л раствора карбоната натрия Na2CO3. Хорошо взбалтывают, не допуская образования пузырьков. Доводят до 50 мл 0,1 моль/л раствором Nа2СО3 и несколько раз перемешивают. Раствор стоек только в течение 10 мин от начала приготовления. В дальнейшем происходит окисление билирубина. Рабочий раствор билирубина: к 13,9 мл свежей негемолизированной сыворотки здорового человека добавляют 2 мл свежеприготовленного основного раствора билирубина и 0,1 мл 4 моль/л раствора уксусной кислоты. Хорошо перемешивают. При этом выделяются пузырьки углекислого газа. Рабочий раствор стоек в течение нескольких дней. Этот раствор содержит точно на 100 мг/л, или 171 мкмоль/л, билирубина больше, чем сыворотка, взятая для приготовления раствора. Чтобы исключить при расчетах количество билирубина, содержащегося в этой сыворотке, при измерении на фотометре из величин экстинкции калибровочных проб вычитают величины экстинкции соответствующих разведений компенсационной жидкости. Для приготовления компенсационной жидкости смешивают 13,9 мл той же сыворотки, которая использовалась для приготовления калибровочного раствора билирубина, 2 мл 0,1 моль/л раствора карбоната натрия и 0,1 мл 4 моль/л раствора уксусной кислоты. Для построения калибровочного графика готовят ряд разведений с различным содержанием билирубина. К полученным разведениям прибавляют по 1,75 мл кофеинового реактива и по 0,25 мл диазосмеси. При появлении помутнения можно добавить по 3 капли 30%-ного раствора едкого натра. Измерение проводят при тех же условиях, что и в опытных пробах, через 20 мин. Из компенсационной жидкости готовят разведения, аналогичные калибровочным (как указано ниже), и далее обрабатывают их так же, как калибровочные пробы.

Для определения билирубина и его фракций в плазме крови используются различные методы, наиболее распространенным из которых является метод Ендрашика-Грофа. Метод основан на взаимодействии билирубина с сульфаниловой кислотой и азотнокислым натрием. При этом связанный билирубин дает быструю реакцию, поэтому ему дали название прямого, а свободный – более медленную реакцию, для ускорения которой применяют различные вещества (кофеин, этанол, и др., которые сначала высвобождают билирубин из белковых комплексов), поэтому он называется непрямым.

Различные методы обнаружения билирубина в моче основаны на его превращении под действием окислителей в другие вещества, имеющие зеленую или красную окраску.

Для определениябилирубина используется колориметриче­ский метод, основу которого составляет реакция Ван ден Берга .

Реакция протекает в 2 стадии: на первой под воздействием соля­ной кислоты разрывается тетрапирроловая цепь, в результате чего образуются два дипиррола, на второй - оба дипирроловых производных диазотируются диазофенилсульфоновой кислотой с превращением их в азобилирубин.

Фракционное содержание билирубина определяется с помощью модифицированного мето­да Ван ден Берга, предложенного Ендрассиком.

Метод принят в качестве унифицированного.

В основе образования билирубина лежит деградация гема гемоглобина и других гемсодержащих белков и ферментов. Гем распадается до биливердина, который восстанавливается в билирубин.

Свободный билирубин токсичен, нерастворим в воде и циркулирует в крови в комплексе с альбуминами. Этот билирубин дает непрямую реакцию Ван ден Берга (после осаждения альбуминов спиртом), поэтому называется непрямым.

Непрямой билирубин, будучи связанным с альбуминами, не проходит через неповрежденные мембраны почечных клубочков и не фильтруется в мочу.

Выведение билирубина осуществляется с желчью через кишечник. Билирубин, связанный с альбуминами, доставляется кровью в печень. Билирубин легко проникает через мембраны гепатоцитов, альбумины остаются в кровотоке. В гепатоцитах билирубин подвергается конъюгации с глюкуроновой кислотой, превращаясь в билирубинмоно- и диглюкуронид. Образованные билирубинглюкурониды нетоксичны, легко растворимы. Они направляются с желчью в кишечник для выведения из организма.

Из кишечника билирубинглюкурониды частично поступают в кровоток и, находясь в крови, представлякгг собой фракцию прямого билирубина, который дает прямую реакцию Ван ден Берга.
Прямой билирубин, в отличие от непрямого, легко проникает через почечные фильтры и может выделяться с мочой.

В физиологических условиях сыворотка крови содержит примерно 25% прямого билирубина (связанного с глюкуроновой кислотой) и 75% непрямого билирубина (альбумин-билирубина).

Таким образом, общий билирубин крови представляет собой суммарное количество непрямого и прямого билирубина.

У здоровых людей в сыворотке крови содержится билирубина 1,7-20,5 мкмоль/л; прямого - 0,4-5,1 мкмоль/л.

Для определения билирубина используется колориметрический метод, основу которого составляет реакция Ван ден Берга. Реакция протекает в две стадии: на первой под воздействием соляной кислоты разрывается тетрапирроловая цепь и образуются два дипиррола, на второй - оба дипирроловых производных диазотируются диазофенилсульфоновой кислотой с превращением их в азобилирубин. Фракционное содержание билирубина определяется с помощью модифицированного метода Ван ден Берга, предложенного Ендрассиком.
Метод принят в качестве унифицированного.

Принцип метода

Билирубин вступает в реакцию азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой с образованием раствора азокрасителя. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию билирубина и выявляется фотометрически.

Оригинальным методом Ван ден Берга устанавливается лишь характер реакции (прямая, непрямая, замедленная), т.е. отмечается преобладание в сыворотке крови того или иного билирубина. Метод Ендрассика, Клеггорна и Грофа дает возможность фракционно определять содержание билирубина. Он прост, удобен в практике, не связан с применением дефицитных реактивов и является наиболее приемлемым для практических лабораторий.

Определение рекомендуется приводить сразу же после забора проб, чтобы избежать окисления билирубина на свету. Гемолиз сыворотки снижает количество билирубина пропорционально присутствию гемоглобина. Следовательно, сыворотка крови не должна быть гемолизирована..

(A. A.H. Van den Bergh, 1869-1943, датский врач)
способ качественного и количественного определения билирубина в сыворотке крови, основанный на появлении красной или розовой окраски при его взаимодействии с диазореактивом Эрлиха; количественное определение производится колориметрически.

Смотреть значение Ван-ден-бе́рга Реа́кция в других словарях

Ван Ден Брук Артур Мюллер — (1876-1924) – немецкий философ, один из основателей движения «Консервативная Революция». Переводчик Достоевского на немецкий язык. Дружил с русским консервативным философом........
Политический словарь

Реакция — - противодействие социальному прогрессу.
Политический словарь

Циркулярная Реакция — - общий механизм, способствующий возникновению и развитию стихийных форм массового поведения (Д.В. Ольшанский, с.425)
Политический словарь

Бумен (boomen) Джозеф Ван Ден (1931-1988) — нидерландский экономист и демограф. Изучал вопросы социально-экономических последствий старения населения, работал в Европейской экономической комиссии (1978-1988).
Экономический словарь

Реакция — реакции, ж. (латин. reactio) (книжн.). 1. только ед. Политика, государственный политический режим, осуществляющий возврат и защиту старых порядков путем борьбы с революционным........
Толковый словарь Ушакова

Реакция — быстрое падение цен после предшествующего
роста.
Экономический словарь

Реакция Предложения — Повышение производительности в результате изменения стимулов; обсуждается в основном в связи с либерализацией рынка в результате структурного урегулирования, в первую........
Экономический словарь

Реакция, Падение Курсов На Бирже — Падение котировок ценных бумаг, следующее за продолжительным периодом роста цен, возможно, в результате изъятия прибыли (profit taking) или неблагоприятных перемен. См. также correction.
Экономический словарь

Стевин, Симон Ван (1548-1620) — - представитель голландской бухгалтерской мысли, первый назвавший бухгалтерию наукой. Стевин считал, что цель бухгалтерского учета - определение всего народного богатства........
Экономический словарь

Функция Реакция Сбыта — -
прогноз вероятного
объема продаж в течение определенного отрезка времени при разных уровнях затрат на один или несколько элементов
комплекса
маркетинга.
Экономический словарь

Reaction (реакция) — Изменение господствующей на рынке тенденции на противоположную в результате чрезмерных продаж на переживающем спад рынке (когда некоторые покупатели привлечены низкими........
Экономический словарь

Абелева-татаринова Реакция — (Г. И. Абелев, род. в 1928 г., сов. иммунолог; Ю. С. Татаринов, род. в 1928 г., сов. биохимик) см. Альфа-фетопротеиновый тест.
Большой медицинский словарь

Адамкевича Реакция — (A. Adamkiewicz, 1850-1921, австрийский патолог; син. Адамкевича-Гопкинса-Коля реакция) цветная качественная реакция на триптофан и триптофансодержащие белки, основанная на фиолетово-синем........
Большой медицинский словарь

Адамкевича-гопкинса-коля Реакция — (A. Adamkiewicz, 1850-1921, австрийский патолог; G. Hopkins, 1861-1947, англ. биохимик; L. Cole, род. в 1903 г., франц. патолог) см. Адамкевича реакция.
Большой медицинский словарь

Адаптационная Реакция — см. Приспособительная реакция.
Большой медицинский словарь

Аллергическая Реакция — общее название клинических проявлений повышенной чувствительности организма к аллергену.
Большой медицинский словарь

Аллергическая Реакция Замедленного Типа — (син. китергическая реакция) А. р., развивающаяся в течение 24-48 часов после воздействия специфического аллергена; в возникновении А. р. з. т. основная роль принадлежит........
Большой медицинский словарь

Аллергическая Реакция Немедленного Типа — (син. химергическая реакция) А. р., развивающаяся через 15-20 мин. после воздействия специфического аллергена, напр. при анафилактическом шоке; в возникновении А. р. н. т.........
Большой медицинский словарь

Аллергическая Реакция Перекрестная — А. р. на перекрестно-реагирующие (общие) антигены.
Большой медицинский словарь

Аллергоидная Реакция — (нрк) см. Анафилактоидная реакция.
Большой медицинский словарь

Анамнестическая Реакция — иммунный ответ организма на повторное введение антигена, характеризующийся значительно более высоким титром антител и более короткими сроками их появления по сравнению........
Большой медицинский словарь

Анафилактоидная Реакция — (анафилаксия + греч. eidos вид; син.: аллергоидная реакция нрк, анафилатоксическая реакция, феномен парагипергии) - неспецифическая аллергическая реакция, характеризующаяся........
Большой медицинский словарь

Анафилатоксическая Реакция — см. Анафилактоидная реакция.
Большой медицинский словарь

Антабусно-алкогольная Реакция — (син. тетурам-алкогольная реакция) симптомокомплекс вегетативно-соматических (гиперемия кожи, сменяющаяся бледностью, тахикардия, одышка, резкое снижение артериального........
Большой медицинский словарь

Аристовского-фанкони Реакция — (истор.; В. М. Аристовский, 1882-1950, сов. микробиолог и иммунолог; G. Fanconi, род. в 1892 г., швейц. педиатр) аллергическая внутрикожная проба со взвесью убитых стрептококков для........
Большой медицинский словарь

Агглютинации Реакция — (РА) - способ выявления и количественного определения Аг и Ат, основанный на их способности к образованию видимых невооруженным глазом агломератов. В д-ке инфекц. болезней........
Словарь микробиологии

Агглютинации Реакция На Стекле — - экспресс-методика постановки РА, в к-рой иммунную с-ку и корпускулярный Аг смешивают на поверхности чистого предметного или специального (с кольцами) стекла В связи........
Словарь микробиологии

Агглютинации Торможения Реакция — торможение агглютинации Аг гомологичными Ат в результате предварительного контакта Ат с иссл Аг, обычно гаптенной природы Основана на конкуренции Аг за паратоп Ат Высокочувствительна
Словарь микробиологии

Агглютинации-лизиса Реакция — см. Лептоспирозы.
Словарь микробиологии

Реакция — (сленг.) - здесь: быстрое падение цен после предшествующего роста.
Юридический словарь

ВАН-ДЕН-БЕРГА РЕАКЦИЯ

(а. а. н. van den bergh, 1869-1943, датский врач) способ качественного и количественного определения билирубина в сыворотке крови, основанный на появлении красной или розовой окраски при его взаимодействии с диазореактивом Эрлиха; количественное определение производится колориметрически.

Медицинские термины. 2012

Смотрите еще толкования, синонимы, значения слова и что такое ВАН-ДЕН-БЕРГА РЕАКЦИЯ в русском языке в словарях, энциклопедиях и справочниках:

• РЕАКЦИЯ в Словаре экономических терминов:
  (сленг.) - здесь: быстрое падение цен после предшествующего …
• ВАН
  Ван —
• ВАН в Справочнике Персонажей и культовых объектов греческой мифологии:
  титул правителей государств и княжеств в Китае и Корее в древности и средние …
• РЕАКЦИЯ в Медицинских терминах:
  (reactio; ре- + лат. actio действие; син. р. психогенная) в психиатрии общее название патологических изменений психической.деятельности, возникающих в ответ …
• РЕАКЦИЯ
  (от ре... и лат. actio - действие) действие, состояние, процесс, возникающие в ответ на какое-либо …
• ДЕН в Большом энциклопедическом словаре:
  (Dehn) Зигфрид Вильгельм (1799-1858) немецкий музыкальный теоретик и педагог. Автор учебников гармонии и контрапункта. У Дена брали уроки М. И. …
• ВАН в Большом энциклопедическом словаре:
  город на востоке Турции, на восточном берегу оз. Ван, административный центр иля Ван. 153 тыс. жителей (1990). Мукомольная, цементная промышленность. …
• РЕАКЦИЯ
  Реакция (полит.) - в широком смысле обозначает общественное движениев направлении резко противоположном предшествовавшему или современному,если оно вызвано его крайностями. Так …
• ДЁН в Энциклопедическом словаре Брокгауза и Евфрона:
  (Dheune) — река в восточной Франции, длиной в 65 км, русло которой на всем почти верхнем течении входит в состав …
• ДЕН в Энциклопедическом словаре Брокгауза и Евфрона:
  (Siegfried-Wilhelm Dehn) — известный немецкий музыкальный теоретик (1796-1858); изучал сначала игру на виолончели, потом теорию композиции под руководством Клейна. Большой …
• ВАН ЧАСТИЦА в Энциклопедическом словаре Брокгауза и Евфрона:
  частица, составляющая иногда приставку к нидерландским фамилиям, произведенным от названия какой-либо местности; часто она пишется слитно с самой фамилией. Соответствуя …
• ВАН ТУРЕЦКИЙ ВИЛАЙЕТ в Энциклопедическом словаре Брокгауза и Евфрона:
  (Van) — турецкий вилайет в юго-восточной Армении, обыкновенно причисляемый к Курдистану, состоит из санджаков: Ван (с 233269 жителями), Муш и …
• ВАН ТИТУЛ в Энциклопедическом словаре Брокгауза и Евфрона:
  (кит. ванг, ган, хан), соответствует нашему князь. Титул этот наследственный и имеет несколько степеней. Когда с ним связывается власть, то …
• ВАН в Энциклопедическом словаре Брокгауза и Евфрона:
  (кит., ванг, ган, хан), соответствует нашему князь. Титул этот наследственный и имеет несколько степеней. Когда с ним связывается власть, то …
• БЕРГА в Энциклопедическом словаре Брокгауза и Евфрона:
  (Berga) — гор. в Каталонии, административный центр, 718 м над уровн. моря, на правом притоке р. Льебрегат, 4996 жит., занимающихся …
• РЕАКЦИЯ
  (от ре... и латинского actio - действие), действие, состояние, процесс, возникающие в ответ на какое-либо …
• ВАН в Современном энциклопедическом словаре:
  титул правителей государств и княжеств в Китае и Корее в древности и средние …
• РЕАКЦИЯ
  [латинское re. против + actio действие] 1) действие, возникающее в ответ на то или иное воздействие; 2) в биологии ответ …
• ВАН в Энциклопедическом словарике:
  титул правителей государств и княжеств в Китае и Корее в древности и средние …
• РЕАКЦИЯ в Энциклопедическом словарике:
  I и, ж. 1. Действие, возникающее в ответ на то или иное воздействие. Положительная р. на критику. 2. Ответ организма …
• РЕАКЦИЯ в Энциклопедическом словаре:
  1, -и, ж. I. см. реагировать. 2. Превращение одних веществ в другие (химическая реакция) или преобразование атомных ядер вследствие их …
• РЕАКЦИЯ
  РЕ́АКЦИЯ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ, см. РОЭ …
• РЕАКЦИЯ в Большом российском энциклопедическом словаре:
  РЕ́АКЦИЯ ИЗЛУЧЕНИЯ, то же, что радиационное трение …
• РЕАКЦИЯ в Большом российском энциклопедическом словаре:
  РЕ́АКЦИЯ политическая, активное сопротивление обществ. прогрессу в целях сохранения и укрепления отживших социальных …
• РЕАКЦИЯ в Большом российском энциклопедическом словаре:
  РЕ́АКЦИЯ (от ре... и лат. асtio - действие), действие, состояние, процесс, возникающие в ответ на к.-л. …
• ДЕН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  Ив. Ив. (1786-1859), рос. инж.-фортификатор, инж.-ген. (1843), чл. Гос. совета (1850). С 1831 гл. строитель крепостей в Царстве Польском (под …
• ДЕН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  (Dehn) Зигфрид Вильгельм (1799-1858), нем. муз. теоретик и педагог. Автор учебников гармонии и контрапункта. У Д. брали уроки М.И. Глинка, …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ЯНМ́ИН (Ван Шоужэнь) (1472-1529), кит. философ-неоконфуцианец, литератор, гос. деятель. Исходил из единства знания и действия в нравств. поведении и утверждал, …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ЭЙК (van Eyck), нидерл. живописцы, основоположники нидерл. иск-ва 15 в., братья: Хуберт (ок. 1370-1426), возможно, начал "Гентский алтарь". Ян (ок. …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ШУХЭ (210-285), кит. врач. В кн. "О пульсе" (т. 1-10, 280) изложил учение о его диагностич. и прогностич. значении. Труд …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ЧУН (27 - ок. 104), кит. философ. Осн. соч. "Взвешивание рассуждений" ("Лунь хэн") объединяет идеи конфуцианства и даосизма, проникнуто рационализмом …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ХАЙЗ (Van Hise) Чарлз Ричард (1857- 1918), амер. геолог. Осн. тр. по докембрию Канадского щита и проблемам …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ФЛЕК (Van Vleck) Джон Хазбрук (1899- 1980), амер. физик. Фундам. тр. по квантовой теории магнетизма и тв. тела. Ноб. пр. …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  Т́ИГЕМ Ф.Э.Л., см. Тигем Ф.Э.Л. …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  Т́АО (1828-97), один из идейных предшественников реформаторского движения в Китае (см. "Сто дней реформ"). Переводчик и публицист. Тр. о …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  СЯОН́УН (1857-1918), кит. актёр и драматург. Выступал в разл. т-рах страны. Лучшая роль - поэт Ли Бо в пьесе "Бродячий …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  СЯНЬЧЖИ (?-878), один из рук. Крест. войны 874-901 в Китае. В 878 его войско разгромлено, сам он …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  СВ́ИТЕН (van Swieten) Герард (1700-72), нидерл. врач. С 1745 работал в Вене, основатель т.н. старой венской школы, ин. поч. ч. …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  МИН (Чэнь Шаоюй) (1904-74), чл. Политбюро ЦК и секр. ЦК КП Китая (КПК) в 1931-45. В 1931 исполнял обязанности ген. …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  МАН (45 до н.э.-23 н.э.), имп. Китая с 9 н.э. (в результате дворцового переворота). Пытался провести реформы (ликвидация частной собственности …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ДЕР В́ААЛЬСА УРАВНЕНИЕ, предложенное Й.Д. Ван дер Ваальсом (1873) ур-ние состояния реального газа, учитывающее конечность объёма молекул и наличие межмол. …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ДЕР В́ААЛЬС (van der Waals) Йоханнес Дидерик (1837-1923), нидерл. физик. Вывел ур-ние состояния для реальных газов (ур-ние В. дер В.). …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ДЕЙК (van Dyck, van Dijck) Антонис (1599-1641), флам. живописец. Работал также в Италии и Англии. Ученик П.П. Рубенса. Виртуозные по …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ДЕ ГР́ААФА ГЕНЕРАТОР, см. Электростатический генератор …
• ВАН в Большом российском энциклопедическом словаре:
  ДАММ (Van Damme; наст. фам. ван Варенбург, van Varenburg) Жан-Клод (р. 1961), бельг. киноактёр. Живёт и работает в США. Чемпион …